一、实验器材及试剂
1、实验器材
名称厂家型号
临界点干燥仪QuorumK850
离子溅射仪IXRFMSP-2S
扫描电子显微镜hitachiSU8010
2、主要实验试剂
试剂厂家货号
电镜固定液ServicebioG1102
无水乙醇国药集团化学试剂有限公司
PBSServicebioG0002
锇酸Ted Pella Inc
二、扫描电镜制样步骤
1、取材固定：新鲜组织确定取材部位，尽量减小牵拉、挫伤与挤压等机械损伤，1-3min内取样，组织块不超过3mm2，用PBS轻轻漂洗将样本表面的血污，毛发等去掉，保护好需要扫描的面并做好标记（如在对面进行剪角处理）。迅速投入电镜固定液室温固定2h，再转移至4°保存。
贴壁细胞：贴壁于盖玻片的细胞培养处理完成后弃培养基，用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液室温固定2h，再转移至4°保存。注意保护好扫描面避免剧烈震荡细胞脱落。
2、后固定：固定好的样品经0.1M磷酸缓冲液PB（（PH7.4）漂洗3次，每次15min。1%的锇酸·0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）室温（20℃）固定1-2h。0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。
3、脱水：组织依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%--酒精每次15min。
4、干燥：将样本放入临界点干燥仪内进行干燥。
（无机材料不需要以上步骤）
5、样本导电处理：将样本紧贴于导电碳膜双面胶上放入离子溅射仪样品台上进行喷金30s左右。
6、扫描电子显微镜下观察采图。
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