马耳他型布氏杆菌的EF-Tu蛋白单克隆抗体MAb及其制备方法与应用

　　摘要：本发明提供了一种布氏杆菌EF-Tu蛋白单克隆抗体MAb及其制备方法与应用，通过将EF-Tu基因克隆到pET30a载体中构建出原核表达载体中表达携带His标签的EF-Tu蛋白，并用纯化的EF-Tu蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞，通过特异性筛选、体外培养、纯化而获得抗马耳他型布氏杆菌EF-Tu?MAb。本发明在筛选时采用原核表达携带GST标签的EF-Tu纯化可溶蛋白来包被ELISA板，这样不仅可以避免筛选到识别His标签蛋白的MAb，而且可溶的GST-EF-Tu蛋白活性更接近天然的布氏杆菌延伸因子Tu蛋白，保证了杂交瘤细胞的特异性。Westem?blot结果表明获得的MAb能够与携带GST或His标签的布氏杆菌EF-Tu蛋白抗原反应，而不与GST标签或大肠杆菌菌体蛋白反应，抗体MAb具有强特异性。

专利类型发明专利
申请人山东农业大学;
发明人王方昆;赵孝民;李宏梅;刘思当;赵宁宁;
地址271018 山东省泰安市岱宗大街61号
申请号CN201510731321.3
申请时间2015年10月30日
申请公布号CN105218668A
申请公布时间2016年01月06日
分类号C07K16/12(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61P31/04(2006.01)I;G01N33/577(2006.01)I;