摘要：本发明公开了一种将目的DNA片段插入载体中的方法，包括以下步骤：1)设计并合成扩增目的DNA片断的引物，该引物的最外侧有3～20个碱基与线性载体最外侧完全互补，用该引物扩增得到目的DNA片段；2)将目的DNA片段和线性载体混合，加入同时具有3’端至5’端外切酶活性和同源重组酶活性的重组酶进行反应，得到插入了目的DNA片段的重组载体。本发明具有外切与同源重组的双重功效，在较大范围内(即3～20个碱基)选择PCR产物与线性载体的同源碱基数量，使重组末端碱基数目的选择更加灵活；无需DNA连接酶，只要把目标载体线性化，PCR产物无需任何酶促处理，直接和目标载体混合，20分钟一站式解决所有问题，实现完美的无缝连接，操作简单，成本较低。
- 专利类型发明专利
- 申请人上海捷瑞生物工程有限公司;
- 发明人肖爱军;邵标;赫英俊;
- 地址200233 上海市宜山路822号508室
- 申请号CN200910051959.7
- 申请时间2009年05月26日
- 申请公布号CN101899467A
- 申请公布时间2010年12月01日
- 分类号C12N15/66(2006.01)I;
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京公网安备11010802043465号
