自1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内。
下面分别介绍透析袋和透析膜使用方法和步骤透析袋使用前处理方法:
1.把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。
2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 10mmol/L EDTA(pH8.0)中将透析袋煮沸10分钟。
3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。
5.冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。
6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。
透析膜使用前处理方法:
1. 戴手套把透析膜剪成适当长度,浸在蒸馏水中 15 min 泡软。
2. 浸入 10 mM sodium bicarbonate 中,并加热至 80℃,一边搅拌至少 30min。
3. 换到 10 mM Na2ull;EDTA 中浸泡 30 min,以新鲜的 EDTA 同样方法处理三次。
4. 再用 80℃ 蒸馏水洗 30 min,然后换到 20% 酒精中,放在 4℃冰箱中保存。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。通常在试验前需要确定透析袋的截留分子量。