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氧电极应用-植物叶片、组织呼吸速率的测定

教育装备采购网 2018-04-23 09:19 围观698次

  植物叶片、组织呼吸速率的测定

  实验准备:

  仪器:氧电极系统一套;30ml针筒,剪刀,双面刀(或单面刀),1ml移液器,镊子,吸管,吸水纸,打孔器。

  试剂:(1)测定介质50mmol/L pH7.5的Tris-HCl缓冲溶液。称取6.05克Tris(三羟甲基氨基甲烷) 800~900ml水中,滴加1mol/L HCl,调pH7.5,加水1000ml。除此之外,测定介质还可用磷酸、Hepes、Tricine等pH7.5 50mmol/L的缓冲液。仅用pH7.5的水溶液也可作测定介质。

  (2)0.5mol/L KCl:称取1.86克KCl溶于50ml蒸馏水中。

  实验步骤:

  1准备好所需的仪器和试剂,安装好氧电极,并与计算机连接,校正(详细操作步骤见厂家提供的说明书或汉语说明书)。

  2材料准备:取小麦、水稻等植物叶片(组织),用打孔器取一定面积(或称取一定重量)(一般按每ml反应体积需0.5cm2叶碎片取样),

  将叶块放入盛有测定介质的小烧杯中,然后将小烧杯放到真空器中进行抽气,排出叶片(组织)细胞间隙内的气体,使叶片沉到底部。或者

  将叶碎块倒入30ml注射器中,进行手工真空渗入,排除叶内气体,使叶块下沉。然后将下沉的叶块取出,用剪刀剪成面积约为2mm2的碎

  片,放入氧电极反应杯中。

  3呼吸速率的测定:

  在盛有叶碎片的反应杯中加入1~2 ml的测定介质,然后放入磁转子。启动磁转子搅拌溶液,平衡1分钟左右后,开始测定,3~5min后

  停止测定。氧电极的使用方法详见汉语说明书。

  注意:如果使用的是透明反应杯,测定叶片的呼吸速率时需要将反应杯遮光。

  4反应结束后,清洗反应杯。重复步骤3,所有实验结束后,按说明书操作,清洗反应杯,清洁电极,保持电极的干燥。(注意事项见说明书)

  5呼吸速率的计算:从记录曲线得到单位时间氧的变化量,根据叶片面积和反应介质的体积计算出样品的呼吸速率。

  完成该实验可以选用的氧电极型号有:Leaflab2(只能用于测定叶片)、Chlorolab2、Chlorolab3、Oxygraph、Oxytherm。

  

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