2017年9月18日,在第十六届人类蛋白质组学年度世界大会(HUPO)上,Bruker推出了用于PASEF质谱的timsTOF Pro系统。该质谱采用了专有捕获离子迁移谱(TIMS)技术,能实现更高速度、更高灵敏、更强大的鸟枪法蛋白质组学分析,具有出色的单次肽和蛋白质鉴定性能。
基于TIMS创新技术的四极杆飞行时间质谱仪(QTOF-MS)由MaxQuant / Perseus和PEAKS Studio蛋白质组学分析软件支持,这种timsTOF Pro方法对于定量蛋白质组学工作流程尤其有利。
从较小样品量的识别性能方面,这种独特的前端TIMS分析仪对更高速度的鸟枪法蛋白质组学进行了优化。其独特的双TIMS几何形状允许离子在第一个TIMS部分中并行累积,并且在实时执行额外的TIMS分离步骤之后,离子从第二个TIMS部分释放出来,用于MS / MS碎裂。这可以产生近100%的占空比,使得这种平行堆积和连续碎裂(PASEF)技术在酶促消化产生的蛋白质混合物中,应用可重复纳流LC-MS分析可以具有前所未有的性能。
PASEF能力代表了性能的改进,因为它提供更高灵敏度和更高速度的鸟枪法蛋白质组学分析,而不损失质量分辨率。而之前,更高的扫描速度通常导致用于鸟枪法蛋白质组学的基于FT的质谱技术具有较低质量分辨率。这些临界限制可以由PASEF消除,允许以高灵敏度以及接近100%的占空比,同时还可以保持前体和产物离子的超高质量分辨率。双TIMS技术这一重要PASEF功能,有助于科学家们深入研究细胞复杂生物学以及发现重要低水平生物学蛋白。同时,这一功能也有助于蛋白质翻译和临床蛋白质组学研究中的验证和纵向研究。
定量蛋白质组学是蛋白质组学研究的关键领域,双重TIMS供电的PASEF提供了超越传统门控时间串联FT的质谱分析局限性的优势。新的timsTOF Pro提供超过四个数量级的动态范围,低肽负载(100-200ng),这使得它非常适合于研究细胞生物学和临床中经常遇到的小细胞群体和低样品量的蛋白质组学。
德国马丁斯堡的马克斯·普朗克生物化学研究所蛋白质组学和信号转导系主任马蒂亚斯·曼(Matthias Mann)表示:“我的实验室与布鲁克合作开发PASEF技术,我们很高兴看到timsTOF Pro实现我们最初设想的鸟枪法蛋白质组学的潜力。这种新技术有可能革新蛋白质组学的几个领域:临床研究,其中速度和定量能力是运行大样本队列的关键;需要增加灵敏度的应用;富含磷酸肽或其中有限数量的细胞可用于分析的样品;并且对于使用等压标记的定量实验,其中使用捕获的离子迁移率的额外分离可以至少部分地消除引起所谓的比例压缩效应导致不可接受的误差的共分裂物质的干扰。我们对技术进一步发展的潜力感到非常兴奋。“
Bruker Daltonics的Omics解决方案副总裁Gary Kruppa表示:“蛋白质组学研究人员总是希望提高速度,灵敏度和定量能力,同时保持高分辨率,准确的质量和高保真度同位素图案,以便更深入地了解蛋白质组。使用PASEF,科学家们现在不需要将扫描速度和敏感度的解决方案进行权衡,它们通过TIMS前体离子选择获得高灵敏度,高扫描速度和无与伦比的特异性这三重效果。这提供了发现低水平生物相关蛋白质的可能性,目前它们是超出了非TIMS质谱仪的性能范围的。“
马丁·马克斯普朗克生物化学研究所计算系统生物化学小组组长Juergen Cox评论说:“Bruker决定采用开放文件格式,以便我们可以直接使用原始数据,将有利于蛋白质组学研究人员的使用MaxQuant和Perseus软件平台。我们对数据质量特别重视,并期待与Bruker合作,通过最先进的客户支持软件和分析统计查询,我们可以使用PASEF在timsTOF Pro上获取数据。“