鸡蛋营养丰富，含有蛋白质、脂肪、胆固醇、卵磷脂、维生素、铁、钙、钾等人体需要的矿物质。然而有研究人员提出，鸡蛋胆固醇含量相对较高，过多摄入鸡蛋会导致人体血清胆固醇增高，引发心血管疾病。由此我们对鸡蛋中胆固醇含量进行研究，探索快速检测鸡蛋中胆固醇含量的方法。
2. 实验部分
2.1 仪器与试剂
仪器： HanonLC7000四元低压高效液相色谱系统(配置高压泵，紫外检测器)，万分之一电子天平，涡旋混合仪，离心机，超声波清洗器
试剂： 胆固醇标准品，甲醇(色谱纯)，异丙醇(分析纯)，乙醚(分析纯)，石油醚(分析纯)，无水乙醇(分析纯)，市售普通鸡蛋
2.2 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱 150mm×4.6mm×5μm;流动相：甲醇-异丙醇(4:1，v/v);流速：1.0mL/min;温度：25℃; 进样量：20μL;检测波长：205nm。
2.3 标准溶液配制
准确称取胆固醇标准品25mg，于25ml容量瓶中，用无水乙醇溶解稀释至刻度，得胆固醇储备液(1.0g/L)。
取胆固醇储备液0.0，0.5， 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，1.0ml于10ml容量瓶中，无水乙醇稀释定容，的浓度为0，0.05 ，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0g/L 胆固醇标准溶液。
2.4 样品前处理
取 鸡蛋称重，除去蛋清，准确称取蛋黄重量。取蛋黄样品2.0g，用20ml高纯水溶解稀释混匀，得蛋黄稀释液(0.1g/ml)。取蛋黄稀释液1.0ml于 具塞离心管中，加无水乙醇1.0ml，涡旋混匀，加乙醚3.0ml，石油醚3.0ml，涡旋混合，将混合液离心(4000r/min)，使液体分层，取上 层有机相;下层再加入2.0ml乙醚和2.0ml石油醚进行萃取，合并上层萃取液，氮吹仪吹干(温度<30℃)，0.5ml乙醇溶解，经 0.45μm有机微孔滤膜过滤后，上机检测。
3. 结果与讨论
3.1 标准工作曲线
配制好的系列胆固醇标准溶液，在设定好的色谱条件下进行色谱分析，进样量为20μL，保留时间为6.72min，每个浓度标准溶液重复进样三次，以峰高H(mAU)为纵坐标，胆固醇标准溶液浓度C(g/L)为横坐标，绘制标准工作曲线，线性回归方程为H=76.45C-0.052，相关系数r=0.9991。
3.2 蛋黄中胆固醇含量
将处理好的蛋黄样品取样测试，进样量20μL，在6.72min胆固醇被洗脱出来，蛋黄其他组分能与胆固醇有效分离，不干扰胆固醇的测定。由胆固醇标准曲线回归方程计算胆固醇含量。(液相图谱件见图1，结果见表1)
图1 蛋黄胆固醇液相图谱
表1 蛋黄胆固醇含量
|
样品编号 |
鸡蛋重量g |
蛋黄重量g |
胆固醇含量（mg/g蛋黄） |
胆固醇含量（mg/个蛋黄） |
|
1 |
60.23 |
15.76 |
12.11 |
190.85 |
|
2 |
58.46 |
14.98 |
11.34 |
169.87 |
|
3 |
59.47 |
15.31 |
10.76 |
164.74 |
4. 结论
我 们建立了利用反相高效液相色谱法快速测定蛋黄中胆固醇的方法，样品无需皂化处理，直接用乙醚和石油醚进行萃取，大大节约了样品前处理时间，操作快速简便， 具有良好的准确度和重现性，可做为测定蛋黄中胆固醇含量的有效方法。另胆固醇主要来自人体自身合成，食物中的胆固醇是次要补充。一般常人每日从食物中摄取 胆固醇200mg，即可满足身体需要。专家建议每天摄入50mg-300mg胆固醇为佳。
